Proteomics 1

Front 1

Nenne 7 Ionisationsmethoden!

Back 1

1. EI - Electron Impact

2. APCI - Atmospheric Pressure Chemical Ionisation

3. PD - Plasma Desorption

4. FAB - FAst Atom Bombardment (1981)

5. FD - FIeld Desoption

6. ESI - Electrospray Ionisation

7. MALDI - Matrix-assisted Laser Desorption/Ionisation

Front 2

Was wird in MALDI als Matrix benutzt?

Back 2

Aromatische Säuren, z.B.

- 2,5-Dihydroxy benzohic acid (DHB)

-
alpha-Cyano-4-Hydroxycinnamic Acid (alpha-Cyano)

Front 3

MALDI - Welche Laser werden benutzt?

Back 3

UV Laser, z.B.

- Nd-YAG Laser (355 nm)

- N2-Laser (337 nm)

Front 4

Wie ist das Prinzip von MALDI?

Back 4

die Matrix absorbiert UV-Licht und wandelt es in Wärmeenergie um. Matrix erhitzt dabei sehr schnell und vaporisiert, zusammen mit der Probe. Durch applizierte Spannung werden Ionen extrahiert

Front 5

Was ist das "Lucky Survivor" Model?

Back 5

- Ionen werden in der Matrix vorgeformt

- Reneutralisation in der Gasphase ist shcneller für Ionen mit höherwertiger Ladung

Front 6

Was ist das Gas Phase Protonation Model?

Back 6

- Ionen werden durch Protonentransfer von den protonierten Matrix-Molekülen gebildet

Front 7

Aufbau der Electrospray Ionisation?

Back 7

Front 8

Wie hoch ist die Flussrate von nanoESI und wie ist die Ionisationseffizienz?

Back 8

- niedrige Flussrate von 5-20 nl/min

- Hohe Ionisationsrate

Front 9

MALDI Imaging:

- Typische Anwendung bei?

- Wodurch ist die Detektion limitiert?

Back 9

Typische Anwendung: Gewebe Proben

Detektion oft limitiert auf abundante Moleküle, die gute Ionisationseffizienz zeigen

Front 10

Was ist die Atomic Mass Unit u?

Back 10

Standard Einheit für atomare Masse.

Definiert als 1/12 der Masse eines ungebundenen C12 Atoms.

Front 11

Was ist ein Isotop?

Back 11

Unterschiedliche Formen eines chemischen Elementes, die die selbe Anzahl an Protonen haben, sich aber in der Anzahl der Neutronen unterscheiden (Bsp. C13, C14)

Front 12

Was sind Isotopologen?

Was sind Isotopomere?

Back 12

Isotopogen:

- Moleküle, die unterscheidlich in ihrer Isotopischen Komposition sind (z.B. H2O, D2O).

Isotopomere:

- Moleküle, die die selbe Anzahl jedes Isotops eines Elementes besitzen, aber an anderen Positionen

Front 13

Was ist der Unetrscheid zwischen der monoisotopischen Masse un dder Average Mass?

Back 13

Monoisotopische Masse:

Masse eines Isotops

Average Mass:

Durchschnittsmasse (nach Gewichtung der Häufigkeit dereinzelnen Isotope)

Front 14

Auflösung, Definition?

Back 14

R = m/dm

Front 15

Absolute und relative Massen Genauigkeit?

Back 15

Absolute: definiert als Unterschied zwischen experimentell gemessenen und kalkulierten Massen.

Relative: Absolute Massengenauigkeit geteilt durch Masse, mit der es definiert ist

Front 16

Was ist die externe Kalibrierung?

Back 16

Durchlaufen eines Kalibrierungsmix vor der eigentlichen Sample Analyse

Front 17

Was ist die interne Kalibrierung?

Was kann man dafür verwenden?

Back 17

Rekalibrierung jedes individuellen Scans während der Sample Analyse durch Benutzung einer bekannten Masse

Polisiloxane können verwendet werden

Front 18

Was für Masse Analysatoren gibt es?

Back 18

- Quadrupol

- Quadrupol Ionen Falle

- Time-of-Flight (TOF)

- Elektrostatische Ionen Falle

- Magnetische Ionenfalle

Front 19

Welcher Masse Analysator hat die Beste Auflösung?

Back 19

Magnetische Ionen Falle

Auflösung: > 1000000

Front 20

2 Typen eines TOF Analysators?

Back 20

1. Lineares Flugrohr

2. Reflektor Flugrohr

Front 21

Quadrupol Analysatoren arbeiten wie ____?

Back 21

Bandpassfilter

Front 22

Wie ist die Auflösung und Massengenauigkeit bei einem Quadrupol?

Back 22

Niedrig (Auflösung 1000 ; Genauigkeit 0,1 Da)

Front 23

Was sind Space-Charge Effects?

Back 23

Wenn zuviele Ionen in einer Ionenfalle sind kommt es zu Space-Charge effects --> Auflösung wird verrinegrt sowie Massegenauigkeit

Front 24

Beispiel eienr magnetischen Ionenfalle?

Back 24

Fourier Transform-Ion Cyclotron Resonance (FT-ICR)

- Supraconducting magnet

- gekühlt durch He

- gekühlt durch flüssigen Stickstoff

- sehr hohe Auflösung (>10^6)

- serh hohe Massengenauigkeit (< 1ppm)

- sehr teuer

Front 25

Was ist eine Orbitrap?

Back 25

- elektrostatische Ionen Falle

- sehr hohe Auflösung ( bis zu 450000)

- sehr hohe Massengenauigkeit ( 1 ppm)

Front 26

Aufbau eines Tandem-Mass-Spectrometers?

Back 26

Front 27

Aufbau eiens Quadrupol-Time-of-Flight (Q-TOF) Analysators?

Back 27

Front 28

Aufbau eines Triple Quadrupol?

Back 28

auch QqQ

Front 29

QqQ - Welche Scan modi gibt es?

Back 29

- Product ion scan

- Precursor Ion scan

- neutral loss scan

- Multiple Reaction Monitoring (MRM)

Front 30

Aufbau eines LTQ-Orbitrap?

Back 30

Front 31

Aufbau eines Q-Exactive?

Back 31

Front 32

Aufbau einer Orbitrap Fusion?

Was ist das?

Back 32

- Tribrid Instrumen -> Kombination aus 3 Masse-Analysatoren