Hplc - Detektion

Front 1

Vika egenskaper väljs detektorer efter?

Back 1

De väljs efter kromatografiska systemets egenskaper, selektivitet, känslighet och robusthet.

Front 2

Förklara en UV-VIS detektors uppgift.

Back 2

UV-VIS detektorer mäter en substans ljusabsorbans med en våglängd inom synligt UV-ljusspektra. En del av ljusets energi övergår till absorberande molekylen som går från grundtillstånd till ett exciterat tillstånd.

Med en monokromator kan ljus med bestämd våglängd (smalt band av våglängder) passera provet och mäta absorbansen av det ljuset.

Front 3

Hur mäts absorbansen i UV-VIS?

Back 3

Skillnaden i intensiteten hos infallande ljus (I0) och intensiteten ho ljuset som transporteras genom provet (I), kallas för transmittans.

Enligt Beers lag är absorbansen hos en substans proportionell till deras koncentration.

Antalet dubbebindningar, konjugering och aromaticitet (kromoforer) påverkar absorbansen. Fler dubbelbindningar ger högre molär absorbivitet (ε); beskriver sannolikheten för absorption. Ökad grad av konjugation och aromaticitet ger en högre absorbans vid längre våglängder.

Front 4

Vad är DAD?

Back 4

Hela absorbansspektrummet registreras genom att polykromatiskt ljus passerar provet och absorbansen för alla våglängder i ljuset registreras.

Detta möjliggör preliminär identifiering och även urskiljning av två substanser med samma retention genom att jämföra deras spektra --> Användbart för metabolit-identifiering.

Hint 4

Diod-Array-detektor

Front 5

Vad är fördelarna och nackdelarna med absorbansdetektion?

Back 5

+ Flesta läkemedel innehåller kromoforer.
+ Billig & användarvänlig instrumentering.
+ Möjlighet till kvalitativ analys genom spektra-registrering från DAD.

- Många endogena ämnen har kromoforer.
- Selektiv provupparbetning före LC krävs ofta.

Front 6

Hur fungerar fluorescens-detektorer?

Back 6

De mäter intensiteten hos emitterat ljus en substans sänder ut efter den har absorberat ljus.

Ämnet går alltså från exciterat till grundtillstånd, kallas fluorescens.

Absorberad energi avges som värme via friktion mellan exciterad & andra molekyler.

Energin hos emitterat ljus < Energi absorberat ljus.

Front 7

Varför är flourescens detektorer känsligare än UV?

Back 7

Signalen är en direkt mätning av emitterat ljus från provet, medan signalen från UV/VIS mäts indirekt genom att mäta intensiteten hos två olika ljus.

Båda ljus har hög intensitet då kan stora under-/överskattningar ske vid små förändringar i intensiteten.

Front 8

Hur skiljer selektiviteten hos fluorescens och UV?

Back 8

Fluorescens-detektorer är selektiva då endast vissa ämnen kan fluorescera jämfört med ämnen som kan absorbera.

Två våglängder väljs, en för absorbans och en för fluorescens --> ökad selektivitet.

Front 9

Hur är sambandet mellan koncentration och fluorescens?

Back 9

Linjärt vid låga koncentrationer. Substanser med ökad konjugation och plana strukturer har kraftig fluorescens. Rörliga strukturer har ingen fluorescens alls.

Hint 9

emittering

Front 10

Hur fungerar elektrokemiska detektorer?

Back 10

Elektrokemiska detektorer är selektiva för analyter som oxiderar/reducerar och man kan välja en potential som gör att en viss substans oxiderar/reducerar. Desto högre potential som går genom detektorn, desto känsligare blir detektionen.

Hint 10

oxidation/reduktion

Front 11

Hur fungerar radiokemiska detektorer?

Back 11

Går ut på att mäta radioaktivt sönderfall hos analyt främst vid metabolismstudier med radioaktivt märkta substanser.

Detekteringen sker indirekt via omvandlingen av strålning till foton via radioluminiscens (scintilationsvätska tillsätts eftr separation.

Hint 11

Metabolismstudier