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62 Cards in this Set
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Comment sont obtenues les cultures primaires ? |
Obtenues a partir d'un tissu puis on sélectionne nos cellules d'intérêt |
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Quelles sont les deux stratégies utilisées pour obtenir des cultures secondaires ? |
1) grattage (mécanique) moins bonne viabilité, amas cellulaire et culture hétérogène 2) trypsinisation (enzyme) mélange de trypsine et EDTA |
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Quelles sont les méthodes utilisées pour détecter le mycoplasme |
1) détection par PCR Venor GeMOne 2) test enzymatique : kit de Lonza |
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Décrire la méthode de détection par PCR VENOR GEMONE |
Mycoplasme= bactérie donc présence d'ARN16S 1) Utilisation d'un témoin interne qui permet de dire que la réaction PCR s'est bien passée (amorces qui reconnaissent ARN16S des bactéries) si amplif du témoin interne alors PCR a marché 2) on a des amorces spé des mycoplasmes et on va amplifier un fragment de 200 paires de bases : si amplif dans un échantillon alors présence d'une contamination a mycoplasme Technique rapide fiable validée par la pharmacopée euro |
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Décrire la méthode test enzymatique : kit de Lonza |
1) on récup le surnageant de culture et on le lyse = lyse de mycoplasme induit une libération d'une enzyme spé qui transforme ADP en ATP 2) on met ensuite un réactif contenant de la luciferase et du mg2+ et on mesure la prod d'ATP par bioluminescence avec un luminometre 3) si prod d'ATP alors lumière 4) rapide (1h) sensible, coût moindre simple mais pas d'identification des espèces |
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Comment éviter les contaminations a mycoplasme entre autre |
1) travail en conditions aseptiques sous PSM (air filtré sur filtre HEPA devient de l'air stérilisé) 2) milieu de culture : stérilisé+ supplémenté = extemporané en ATB (pénicilline pour les gram+ ou streptomycine pour gram-) et antifongiques (ampho B) |
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Pourquoi vas t-on utiliser des cultures de cellules d'insectes ? |
Pour les pseudo particules virales : vaccins Pour les protéines recombinantes |
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Pourquoi vas t-on utiliser des cultures de cellules mammifères ? |
Pour prot recombinantes, vaccins et thérapies géniques et cellulaires |
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Concernant les protéines thérapeutiques, quels sont les marqueurs de sélection pour la transfection stable ? |
1) dihydrofolate reductase (DHFR). 2) Glutamine synthetase |
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Concernant les marqueurs de sélection pour la transfection stable : expliquez le fonctionnement d'un marqueur DHFR et GS |
DHFR : plasmide possède le gène et est DHFR+ et la cellule hôte est DHFR - donc permet de sélectionner les cellules transfectées GS : plasmide possède le gène et la cellule hôte ne le possède pas (plus facile que le DHFR) |
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C'est quoi un Anticorps ? |
C'est une immunoglobuline a fonction d'anticorps : ces IG sont des glycoprotéines solubles sécrétées par des plasmocytes (LB activés par une cible reconnue=antigène) |
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La particularité des Ac réside dans leur dualité fonctionnelle : une région variable dite V qui constitue la partie effectrice (région souvent glycosylee) de l'Ac qui élimine les cibles et une partie constante dite C qui constitue le site de fixation de l'Ag. VRAI OU FAUX |
Faaaux c'est l'inverse !!! |
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Comment obtenir un anticorps monoclonal ? (Décrire technique des hybridomes) |
Technique des hybridomes : 1) fusion cellulaire : on se munit de l'Ag d'intérêt, de souris et cellules de myélome de souris qui ont pour particularité d'être immortelles, non sécretrices d'Ac et HGPRT- 2) la sélection des hybridomes se fait sur milieu HAT : donc une fois fusion cellulaire on a : - des cellules de myélome HGPRT- qui pourront pas s'engager dans la voie secondaire - des plasmocytes non immortels qui vont se multiplier puis mourrir - nos hybridomes d'intérêt (HGPRT+) qui pourront donc synthétiser des NT par la voie secondaire, immortels et secreteront notre AcM 3) isolement des hybridomes d'intérêt : par la technique de dilution limite de telle sorte a n'avoir qu'une cellule par puit. Les Ac sont ensuite sécrétés dans le surnageant du milieu de culture qu'on récup pour faire des tests Élisa 4) Production d'AC a grande échelle |
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Que permet le milieu HAT? (Hypoxanthine Aminopterine, thymidine) |
2 voies sont possibles pour synthétiser des nucléotides : voie principale de Novo et voie secondaire sauvage 1) voie principale : bloquée par Aminopterine du milieu HAT 2) voie secondaire : a partir de hypoxanthine et thymidine grace a une enzyme la HGPRT Donc sur milieu HAT pas de voie de Novo car bloquée et pas de voie sauvage pour les cellules de myélome HGPRT- |
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Le gène DHFR d'un plasmide est un marqueur de sélection dans des cellules DHFR + VRAI ou faux |
Faux pour les cellules DHFR - |
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Le MTX inhibiteur de la DHFR permet de réaliser une amplification génique du plasmide dans le génome de la cellule hôte VRAI ou FAUX |
Vrai : MTX = methotrexate qu'on utilise en très p'tite quantité |
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Le promoteur SV40 est reconnu uniquement par l'ARN polymérase virale Vrai ou FAUX |
Faux aussi reconnu par les arn polymérase eucaryotes |
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Le MTS est un inhibiteur de la glutamine synthétase Vrai ou FAUX |
Vrai |
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Après fusion des plasmocytes avec les cellules de myélome le milieu HAT permet de sélectionner les cellules de myélome Vrai ou faux |
Faux permet de sélectionner les hybridomes |
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L'aminopterine permet de bloquer la voie sauvage de la synthèse des NT Vrai ou faux |
Faux |
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La voie sauvage de synthèse des NT nécessite la présence d'HGprt Vrai ou faux |
Vrai |
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Une chaîne est codée par des segments de gènes présents sur des chromosomes différents Vrai ou faux |
Faux sur le même chromosome |
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La région variable de la chaîne lourde est codée par des segments de gènes V D J Vrai ou faux |
Vrai |
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Les segments des gènes se rapprochent au cours de la maturation des cellules progenitrices en LB Vrai ou faux |
Vrai |
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Les hyper mutations somatiques ont lieu sur les régions codant les FR Vrai ou faux |
Faux sur régions CDR |
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Les segments de gènes des régions V et J d'une même chaîne sont situés sur des locis différents d'un chromosome Vrai ou faux |
Vrai |
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Les AcMr chimériques contiennent 25% de séquences protéiques humaines Vrai ou faux |
Faux 75% |
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Les AcMr complétement humaine peuvent être obtenus par la technique du phage display Vrai ou faux |
Vrai |
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Pour produire les Acmr humanisés il est nécessaire d'avoir l'ac monoclonal murin reconnaissant l'Ag Vrai ou faux |
Vrai c'est grâce a lui qu'on va identifier les AA indispensables a la reco des AG |
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Pour produire les Acmr humanisés il est nécessaire d'identifier l'Ac monoclonal humain proche de l'Ac murin Vrai ou faux |
Vrai |
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Pour produire les Acmr humanisés je dois synthétiser ou faire synthétiser une molécule d'ADN codant une séquence variable mixte : humaine et murine Vrai ou faux |
Vrai |
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Pour produire des AcMr chimériques il faut posséder l'hybridome produisant l'ACM murin reconnaissant l'Ag Vrai ou faux |
Vrai sinon on peut pas extraire l'ADN et donc pas de PCR |
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Pour produire des AcMr chimériques l'ADN codant les régions variables est obtenu par PCR a partir de cet hybridome Vrai ou faux |
Vrai |
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Pour produire des AcMr chimériques l'expression se fait dans des cellules bactériennes Vrai ou faux |
Faux ce sont des grosses molécules glycosylees et avec des ponts dissulfures donc l'expression ne peut se faire dans les cellules bactériennes |
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Concernant le phage display : c'est une méthode qui permet de présenter a une extrémité du phage une protéine recombinante fusionnée avec la P3 du phage Vrai ou faux |
Vrai |
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Concernant le phage display : le phage helper réplique son Adn sous forme simple brin Vrai ou faux |
Faux |
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Un phagemide contient tout le génome du phage m13 Vrai ou faux |
Faux contient du phge m13, ORI et le gene d'intérêt uniquement le reste des infos est apporté par le phage helper |
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Les ScFv peuvent être obtenus a partir de banques d'ADNc codant les régions variables L et H Vrai ou faux |
Vrai |
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Les MCB dérivent du clone sélectionné contenant le vecteur d'expression et sont utilisés en production Vrai ou faux |
Faux elles sont utilisés pour les ptites productions |
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Les WCB sont utilisés par l'expansion d'une ampoule de MCB (subculture) = banque de cellules de travail précieuse utilisée le plus souvent en production Vrai ou faux |
Vrai |
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Que nécessite l'obtention d'un organogel ? |
Un organogelifiant (acide 12 hydroxystéarique= HSA) et un liquide organique |
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Def d'un organogelifiant |
Molécule capable d'immobiliser des substances liquides organiques ou lipidiques de faible masse moléculaire Ce sont des ptites molécules qui s'auto assemblent dans le liquide en réseau 3D par interactions de faible énergie et permettent d'assembler les molécules et d'obtenir une consistance visqueuse |
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A partir de quel pourcentage d'HSA ça commence a devenir toxique ? |
15% |
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Quelles sont les différentes approches thérapeutiques utilisées en thérapie génique ? |
1) compensation : un gène normal est introduit à la place du défectueux 2) inhibition spécifique de l'expression du gène défectueux 3) "suicide" induction de l'apoptose 4) édition génomique |
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Concernant l'approche par inhibition que peut on citer ? |
1) thérapie avec des ARN ou des ADN interférant notamment la thérapie anti sens les cibles sont les Arn messagers qui sont dégradés |
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Par quel complexe seront reconnus les siRNA (les p'tits Arn interférants) ? |
Le complexe RISC : pour RNA INDUCED SILENCING COMPLEX |
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Décrire la thérapie anti sens avec les siRNA |
1) prise en charge du siRNA par le complexe RISC 2) dénaturation du siRNA 3) les Arn cellulaires sont scannés par le complexe RISC - siRNA (brin antisens) 4) fixation du brin antisens sur l'ARN cible 5) destruction de l'ARN cible par l'endonucléase (prot Argonautes qui fait partie du complexe RISC) 6) recyclage du complexe |
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Différence entre transformation, transfection et transduction |
1) introduction plasmide dans bactérie 2) introduction plasmide dans cellule eucaryote 3) introduction plasmide par un virus |
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Par quels moyens l'édition génomique peut être effectuée dans le cadre des systèmes guidage/nuclease dans la reparations de cassure d'ADN double brin ? |
Par les ZFN = Zinc finger nucleotide Et les TALEN = transcription activator like effector nuclease (plus simple que les ZFN) |
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Pour quelle utilisation allons nous préférer l'utilisation de CRISPR/CAS9 ? |
Pour éteindre l'expression du gène knock out d'un gene respo pour la production d'une prot indésirable |
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Dans la thérapie génique, comment livrer le gène/construction "guérissant" dans les cellules cibles ? |
A l'aide de vecteur |
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Donner la def d'un vecteur et le décrire (contenant, rôle) |
- contient le gène/construction d'intérêt - transfére le gène dans un nombre suffisant de cellules - transporte le gène dans le noyau = expression du gène - production de protéines sur une période suffisante pour obtenir un effet thérapeutique |
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Citer les vecteurs viraux qui sont utilisés |
- rétrovirus - lentivirus - adenovirus - adenovirus associé |
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Quelles sont les caractéristiques recherchées pour un vecteur viral ? |
1) Ciblage et expression (tropisme cellulaire adaptable, régul transcription possible, stabilité d'expression, matériel génétique inséré de grande taille) 2) sécurité (recombinaison faible/absente, toxicité faible, rep immuno faible) 3) production (packaging cell lines aisément cultivables, prod de virus a hauts titres infectieux) |
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Les vecteurs gammaretroviraux sont basés sur le virus VIH1 et les vecteurs lentivirus sont basés sur le virus MLV VRAI OU FAUX |
Faux c'est l'inverse |
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Le cycle infectieux des adenovirus peur être divisé en deux phases : phase précoce et phase tardive Vrai ou faux |
Vrai |
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Quelles sont les trois piliers d'évaluation du dossier d'AMM ou CTD ? |
QSE = quality security and efficacité |
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Quelles sont les caractéristiques d'un bon candidat medoc au développement ? |
- brevetable - peu cher - stables - atoxique - non mutagène - bien absorbé per os - facilement synthetisable - actif sur diff modèles animaux - si plusieurs isomères prendre 'e plus actif - original - métabolisme maîtrisable |
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Quels sont les différents modes de culture en bio réacteur ? |
- mode BATCH ou discontinu - mode FED BATCH ou culture alimentée - mode CONTINU - mode PERFUSE |
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Quelles sont les trois types de matériaux utilisés dans la conception d'un biomatériau ? |
Les céramiques Les polymères ou matériaux organiques Les métaux |
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Étapes de dvlm d'un biomatériau |
1) concept initial 2) cahier des charges 3) propriétés recquises 4) sélection des matériaux 5) étude de dégradation mécanique , chimique et biologique 6) test de biocompatible 7) éval clinique |
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Mutagène = change le génome Cancérigène= facteur provoquant aggravant ou sensibilant l'apparition d'un cancer Genotoxique : structure du génome modif au nv spermatozoïdes et ovocytes VRAI ou faux |
Vrai |
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