Tema 3 Y 4: Instrumentación Y Tecnología Para El Estudio De La Célula.

Front 1

¿cuáles son los métodos de Instrumentación y tecnología para el estudio de la célula?

Back 1

1- Métodos de análisis estructural
2- Métodos de observación directa de células y tejidos
3- Fraccionamiento celular y análisis de sus moléculas
4- Tecnología del DNA recombinante.

Front 2

Describa los Métodos de análisis estructural

Back 2

–  Análisis microscópico
•  microscopio óptico
•  microscopio electrónico
•  criofractura

–  Preparación de tejidos para microscopía. Técnica histológica
–  Métodos histoquímicos e inmunocitoquímicos
–  Hibridación in situ
–  Autorradiografía

Front 3

¿que es el límite de resolución (ejemplos) y la fórmula de abbe?

Back 3

Límite de resolución: –  distancia mínima entre dos puntos para que puedan distinguirse como tales.
Ejemplos: –  Humano: 0,23 mm –  Microscopio óptico: 240 nm –  Microscopio electrónico: 0,3 nm
Fórmula de Abbe: LR=0,61 x longitud de onda / AN •  AN (Apertura Numérica) = n x senα –  n: índice de refracción del medio entre objeto y lente »  aire: 1 »  aceite de inmersión: 1,51 –  α: ángulo de semiapertura de la lente

Front 4

dibuje un microscópio y nombre sus partes.

Back 4

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Front 5

¿cuales son los tipos de microscopio optico segun diferencias de aumento de contrastes?

Back 5

Contraste de fases
Contraste interferencial (Normarski)
campo claro
campo oscuro

Front 6

explique el microscopio optico de fluorescencia.

Back 6

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Front 7

explique el microscopio confocal.

Back 7

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Front 8

elementos básicos del microscopio electrónico.

Back 8

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Front 9

explique el m. electronico de barrido

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Front 10

explique el m. electrónico de transmisión.

Back 10

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Front 11

explique la criofractura.

Back 11

se trata de una técnica usada en microscopía electrónica por el cual se consigue partir la célula justo por la región hidrofóbica de la bicapa lipídica, obteniéndose muestras en las que es posible observar las proteínas y demás estructuras que en ella se encuentran. Para ello se somete a la muestra a un rápido proceso de congelación en nitrógeno líquido tras el cual se produce el corte o fractura.

Front 12

explique los pasos para preparar una muestra para microscopía.

Back 12

fijación (métodos)
inclusión (concepto y materriales)( estufa para inclusion en parafina)
corte (concepto y tipos) (microtomo de rotación, ultramicrotomo, criostato: criostato Aparato utilizado en anatomopatología que consiste en un microtomo especial utilizado para congelar y obtener posteriormente cortes de tejido para ser estudiados.

tinción. (procedimientos fisico-químicos - histoquímica - (inmunohistoquímica) - (hibridación in situ)

Front 13

explique el procedimiento de preparación de muestras para MET.

Back 13

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Front 14

Enumere los métodos de tinción convencionales.

Back 14

Hematoxilina-eosina (H-E)
Mallory-azán
Orceína
Van Gieson

Front 15

enumere los métodos histoquímicos

Back 15

PAS (Carbohidratos)
Sudán (lípidos)
Hierro coloidal
Feulgen (DNA)

Front 16

explique los métodos inmunocitoquímicos (método directo e indirecto)

Back 16

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Front 17

explique la hibridación in situ

Back 17

-  se basa en la capacidad que tienen los ácidos nucleicos de hibridarse (unirse las monocademas que tienen secuencias de bases complementarias)
-  se utilizan sondas con una secuencia de bases conocida. Las sondas están marcadas (en el caso de la figura es fluorescente: FISH)
-  sirven para demostrar las secuencias de ácidos nucleicos correspondiente a determinados genes

Front 18

explique la autorradiografía

Back 18

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Front 19

¿Cuáles son los Métodos de observación directa de células y tejidos?

Back 19

–  Cultivo de células y tejidos
–  Manipulación de células vivas
–  Separación de células

Front 20

explique el Cultivo de células y nombre algunas líneas celulares usadas actualmente.

Back 20

-  permite estudiar in vivo poblaciones celulares fuera del organismo -  categorías: - cultivo de células -  cultivo de tejidos -  cultivo de órganos -  medios de cultivo -  clon celular -  cultivos primarios y secundarios -  líneas celulares -  células híbridas
Primer cultivo de células lo realizó George Gey, de la Johns Hopkins University, en 1951, con células provenientes de un tumor maligno de Henrietta Lacks (células HeLa). La cepa se sigue usando hoy día en laboratorios de todo el mundo

Front 21

¿qué son las células híbridas?

Back 21

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Front 22

¿qué es la manipulación de células vivas?

Back 22

- tinciones vital y supravital - azúl tripán: estudio de fagocitosis - rojo neutro y verde Jano: estudio de leucocitos - micromanipulación mecánica

Front 23

¿qué es la separación de células?

Back 23

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Front 24

¿cuales son los métodos de Fraccionamiento celular y análisis de sus moléculas?

Back 24

–  Centrifugación diferencial
–  Separación de proteínas mediante cromatografía
–  Determinación del tamaño y subunidades proteicas mediante electroforesis

Front 25

¿qué es la centrifugación diferencial?

Back 25

El precipitado difiere en cada fracción:
- núcleo (fracción nuclear)
- mitocondrias, lisosomas, peroxisomas (fracción mitocondrial)
- “microsomas” y pequeñas vesículas (fracción microsomal)
- ribosomas, grandes moléculas (fracción ribosómica)

Front 26

que es la Cromatografía ?

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-  variedad de técnicas que separan moléculas al desplazarse éstas en una matriz porosa -  los componentes se separan en función de la diferente solubilidad relativa en el solvente

Front 27

explique la Electroforesis en gel de poliacrilamida

Back 27

- se puede determinar el tamaño y la composición de subunidades de una proteína

Front 28

explique la Tecnología del ADN recombinante
Métodos y técnicas, Aplicaciones básicas y Aplicación médica

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Front 29

explique la Clonación del ADN

Back 29

- sirve para producir grandes cantidades de un segmento de ADN específico

Front 30

¿que son los ratones transgénicos?

Back 30

Ratones transgénicos (knockout) -  carecen de un gen funcional que normalmente contienen -  obtención tras un proceso complicado -  gran utilidad en: -  estudio de las bases genéticas de enfermedades humanas -  conocimiento de procesos celulares en los que participa el producto de un gen determinado

Front 31

¿que es la Amplificación de ADN por PCR? ¿cuales son sus usos clínicos?

Back 31

-  se sintetizan grandes cantidades de ADN a partir de una única molécula de ADN -  diagnóstico muy sensible en pruebas de genética humana y en infecciones
Usos clínicos PCR: - Identificación agentes infecciosos (v.g. HPV ) - Identificación mutaciones
-  pacientes subfértiles -  candidatos a ICSI
microdeleción del Y por PCR

Front 32

que son los microarrays o biochips

Back 32

•  Permiten investigar cientos o miles de genes en un experimento •  Aplicaciones: –  Correcta clasificación de tumores –  Farmacogenómica