Cellodling

Front 1

Hur används cellodling?

Back 1

En process där celler odlas utanför kroppen. Cellodling används bla för diagnostik, cancerforskning, odling av stamceller, produktion av virus, antikroppar, läkemedel.
Cellerna som odlas kan identifieras via morfologi (ljusmikroskopi), genetikanalys (DNA) och Fenotypanalys (immunhistokemi, flödescytometri).
Cellfunktioner vilka går att analysera med expreminetella metoder; DNA (syntes, omsättning), RNA (syntes), syntes av olika typer av protein, membranfunktioner, ämesomsättning, vidhäftningsförmåga, förmåga att fagocytera, differentiering, apoptos och nekros.
Odling av celler indelas i 2 huvudområden: cellodling - odling av enstaka celler, celler i cellsuspension (fria celler) eller monolayer-kultur (adherenta celler).
Organkultur: odling av hela organ.

Front 2

Vad är primärkultur?

Back 2

Innebär att vävnaden finfördelas och celler isoleras med enzymatiska metoer (kollagnas, trypsin) och
Ca2+ - fritt medium (EDTA, EGTA).

Front 3

Vad är cellinje?

Back 3

Cellerna sätts i kultur och får börja dela sig.
När dessa celler delats sig så mycket att de måste delas på flera odlingsflaskor har man fått fram en CELLINJE.

Front 4

Vad är passage?

Back 4

"Splitta" celler är när man delat upp sina celler på flera odlingsflaskor efter en tids odling.
Tillväxten av cellerna kan hämmas en tid efter passage.

Front 5

Vad är tillväxtkurva?

Back 5

En tillväxtkurva visar en bild av mikroorganismers tillväxt med X-axel som står för tiden och Y-axel för antalet celler.
Med tillväxtkurvor kan man bestämma cellers tillväxthastighet och bestämma hur olika tillväxtbetingelser påverkar tillväxten.
Det finns 4 olika faser:
- Lagfasen
- Tillväxtfas (exponentiell fas)
- Stationära (platåfas)
- Avdödningsfas

Front 6

Vad är lagfasen?

Back 6

Lagfasen är den första fas som mikroorganismers tillväxt genomgår, under fasen anpassar sig mikroorganismerna till nya tillväxtförhållande för att övergå från vila till förökning i tillväxtfasen (exponentiell fas).

Front 7

Vad är tillväxtfas (exponentiell fas)?

Back 7

Där bakterier börjar dela sig. Man kallar fasen för exponentiell eftersom att tillväxten sker logaritmiskt.

Front 8

Vad är stationärfasen (platåfas)?

Back 8

Tillväxten kommer att avta eftersom mängden avfallsprodukter ansamlas och mängden näring avtar. Kurvan når sin platåfas när antalet nybildande celler är lika stort som antalet döda celler.

Front 9

Vad är avdödningsfas?

Back 9

Innebär att förhållandet blir så dåligt för bakterierna, så att antalet döda celler överstiger antalet nybildande celler.
Då sjunker det totala antalet celler i kulturen. Fördubblingstiden (en populationsfördubbling är när alla de ursprungliga cellerna har delat sig). Många celltyper slutar att dela sig efter ca 50 populationsfördubblingar.
Tumörceller kan dela sig i det oändliga och immortila (odödliga) och har telomeras-aktivitet.

Front 10

Vad är generationstiden?

Back 10

Generationstiden (fördubblingstid) innebär den tid som åtgår för en population bakterier i en exponentiell tillväxt att fördubbla sitt individantal.

Front 11

Vilka olika steriliseringsmetoder finns det?

Back 11

Det finns 4 olika:
- Autoklavering (ångsterilisering): 115-130 grader
- Torrsterilisering: 160-180 grader
- Gassterilisering (formalin)
- Strålsterilisering (gammastrålning)

Front 12

Vad har odlingsmediers för funktion?

Back 12

Odlingsmedium som man använder har till uppgift att efterlikna den extracellulära miljön som cellerna lever i under in vivo förhållande.
För att skydda cellerna mot kontamination tillsätts också antibiotika.

Front 13

Vad innehåller odlinsgsmediet?

Back 13

Odlingsmediet innehåller:
- Salter
- Aminosyror
- Vitaminer
- Glukos
- Buffert (uppätthålla pH)
- Tillväxtfaktorer:
- serum
- antibiotika
- pH-indikator

Front 14

Vad har odlingsmediets innehåll för funktion?

Back 14

Serumets funktioner i odlingsmediet är:
* näringsämnen
* kolhydrater
* aminosyror
* lipider
* vitaminer
* proteiner
* tillväxtfaktorer
* betydelse för viskositet och det
* kolloidosmotiska trycket
* pH-buffert

Front 15

Vilka odlingskärl finns det?

Back 15

Det finns 3 olika:
- Odlingsflaskor i sterilspecialbehandlad plast, då kan cellerna adherera
- Petriskålar
- Odlingsplattor

Front 16

Redogör för frysförvaring av celler (temp).

Back 16

Nedfrysning av celler innebär att man, beroende på vilken temp cellerna bevaras i, förvarar cellerna i ett mer eller mindre inaktivt metabolt tillstånd.
Frysta celler kan förvaras vid -80 grader mellan 0,5-2 år, men för att vara säker på att cellerna bibehåller sin kvalitet över 12 månader bör de förvaras vid -130 grader.
Vid denna temp upphör de enzymatiska processerna i cellen.
Cellerna kan även förvaras vid -196 grader i tank med flytande kvävgas.

Front 17

Varför använder man trypsin/EDTA lösning?

Back 17

Används om cellerna har adherat till odlingsflaskans botten.
Genom trypsinering bildas ett komplex som gör att cellerna lossnar från odlingsflaskan. Subkultiveringen ska ske enzymatiskt vilket betyder att man använder EDTA och Trypsin 0.6% Trypsin/EDTA,
EDTA (etylendiamintetraättiksyra) är ett chelat d.v.s. en komplexbildare, vilken kan bilda komplex med metalljoner.

Front 18

Varför använder man Ca2+ fritt medium vid trypsinering av celler?

Back 18

För att få cellerna att inte adherera till odlingsflaskan.

Front 19

Varför trypsinerar man vid 37 grader celsius?

Back 19

Trypsineringen sker vid 37 grader eftersom att vid en lägre temperatur kommer metabolismen att påverka celltransporten genom plasmamembranet och detta i sin tur påverkar jonbalansen och proteinbalansen.
Därför är 37 grader en ideal temperatur för trypsineringen.

Front 20

Förklara varför man använder DMSO vid nedfrysning?

Back 20

För att undvika att iskristaller bildas i cellerna vid nedfrysning används DMSO (dimetylsulfoxid) som infrysningsmedium.
DMSO ersätter vattenmolekylerna i cellerna.
DMSO är ett polärt lösningsmedel vilket penetrerar cellen och tränger ut vattnet från cellen -> Minskar bildning av iskristaller intracellulärt.

Front 21

Varför ska man droppa ner DMSO långsamt i cellsuspensionen?

Back 21

Man droppar ner DMSO långsamt eftersom att när vattnet ska tränga ut ur cellen och ersättas med DMSO:n får det inte gå för fort för vattnet att tränga ut eftersom att cellerna kan ta skada och gå sönder.

Front 22

Varför ska nedfrysningen ske långsamt?

Back 22

FRÅGA!
Vid nedfrysning stoppas metabolisemen.

Front 23

Vilken temp bör det vara i odlingsskåpet och varför r detta viktigt?

Back 23

Temperaturen i inkubatorn bör vara 37 grader.
En jämn temperatur är viktig.
Vid för höga temperaturer skadas cellerna.
Om cellkulturen inkuberas vid 42 grader under flera timmar dör cellerna. Temperatursänkningar har inte lika stadig effekt på celler i odling. Cellerna klarar 20 grader i ca ett dygn.

Front 24

Varför är CO2 koncentrationen viktig i odlingsskåpet?

Back 24

CO2-koncentrationen i en inkubator hålls på 5 %. HCO3- -innehållet i odlingsmediet är i jämvikt med CO2 koncentrationen i inkubatorn.

Front 25

Varför har man destillerat vatten i odlingsskåpet?

Back 25

Luftfuktigheten i en inkubator är viktig eftersom vätska från odlingsmediet avdunstar. Avdunstningen leder till att koncentrationen av partiklar i odlingsmediet förändras och det sker ökning av osmolariteten.
I inkubatorn ska det därför finnas någon typ av vattenkärl som fylls med destillerat vatten.
Ett kärl med destillerat vatten bibehåller en jämn luftfuktighet i odlingsskåpet -> osmolariteten i odlingsmedlet behålls konstant.

Front 26

Varför bör man inte slänga antibiotikarester i slasken?

Back 26

Eftersom antibiotika i miljön kan skapa multiresistenta bakterier så måste allt odlingsmedium samlas upp i slaskflaskor.