Use LEFT and RIGHT arrow keys to navigate between flashcards;
Use UP and DOWN arrow keys to flip the card;
H to show hint;
A reads text to speech;
19 Cards in this Set
- Front
- Back
|
Exempel på proteiners egenskaper som man vill få fram genom rening? |
Sekvens, storlek/massa, laddning, löslighet, bindningsförmåga, (struktur) |
|
|
Hur frigörs proteiner från cellen i reningsprocessen? |
Homogenat framställs genom att förstöra cellmembranen och blandningen delas upp mha centrifugering och man får en pellet (tungt material) och en supernatant. Supernatanten centrifugeras åter igen för att separera ytterligare. |
|
|
Utifrån vilka kriterier kan proteiner renas fram? |
Löslighet, storlek, laddning och bindningsförmåga. |
|
|
Vilka metoder används för att rena proteiner? |
Ursaltning, Dialys, Gelfiltreringskromatografi, Jonbyteskromatografi, Affinitetskromatografi. |
|
|
Hur fungerar ursaltning? |
Olika proteiner reagerar olika på olika saltkoncentrationer, och faller därför ut olika. |
|
|
Hur fungerar dialys? |
En jämviktsreaktion där diffusion sker över ett konstgjort membran (påse med porer). Proteiner för stora för att kunna ta sig över membranet, på så sätt kan små molekyler avlägsnas. |
|
|
Hur fungerar gelfiltreringskromatografi? Vad mäter det? |
Interaktion mellan proteiner/molekyler och beads. Små molekyler går sakta genom gelen, stora snabbare pga mindre "motstånd". Små molekyler kan gå genom vätskan inuti beadsen medan stora molekyler går genom gelen direkt utan att de fördröjs av beadsen. |
|
|
Hur fungerar jonbyteskromatografi? Vad mäter det? |
Beads har laddning som antingen attraherar eller repellerar olika proteiner/molekyler beroende på deras laddning. Attraktion till beads fördröjer och tvärt om för repulsion. |
|
|
Hur fungerar affinitetskromatografi? Vad mäter det? |
En kovalent bindning till beads sker. T.ex. kan glukos sitta på beadsen vilket gör att glukosbindnade protein binder till beadsen, medan andra icke-glukosbindande passerar. Kan även göras med ex. DNA-bindande proteiner. |
|
|
Hur fungerar gelelektrofores? Vad mäter det? |
Elektriskt fält skapas över en gel och proteiner separeras map storlek där de minsta proteinerna går snabbast pga minst friktion/motstånd. |
|
|
Hur fungerar SDS-gelelektrofores? Vad mäter det? |
Separering map massa. Denaturering av protein med SDS, där SDS-anjoner binder till proteinet så att proteiner får samma negativa laddning per längdenhet. |
|
|
Hur fungerar isoelektrisk fokusering? Vad mäter det? |
pI (isoelektrisk punkt), då protein har nettoladdning = 0 vid ett visst pH. Protein attraheras av elektrod tills dess att det blir oladdat då det färdas i ett fält med olika pH. |
|
|
Hur fungerar 2D-gelelektrofores? Vad mäter det? |
En kombination av SDS och isoelektrisk fokusering. |
|
|
Hur isolerar man ett protein utifrån storlek? |
SDS-gelelektrofores. Separering map massa. Denaturering av protein med SDS, där SDS-anjoner binder till proteinet så att proteiner får samma negativa laddning per längdenhet. Dessa rör sig sedan olika snabbt genom gelen vilken man sätter spänning över. |
|
|
Hur isolerar man ett protein utifrån bindningsegenskaper? |
Affinitetskromatografi. Kovalent bindning till beads sker. T.ex. glukos på beadsen gör att glukosbindande protein binder till beadsen, medan andra icke-glukosbindande passerar.Kan även göras med ex. DNA-bindande proteiner. |
|
|
Hur isoleras proteiner utifrån laddning? |
Jonbyteskromatografi. Beads med laddning som attraherar eller repellerar proteiner/molekyler beroende på deras laddning.Attraktion till beads fördröjer och tvärt om för repulsion. |
|
|
Hur isoleras proteiner utifrån löslighet? |
Olika proteiner reagerar olika på olika saltkoncentrationer, och faller därför ut olika. Även dialys kan användas för att skilja lösta från olösta proteiner. |
|
|
Med vilka metoder kan man bestämma ett proteins 3D-struktur m. atomär upplösning? Vad är förutsättningarna för att använda dessa och vilken information får man ut? |
Röntgenkristallografi - protein i kristallin form, diffraktionsmönstret ger elektrondensiteten. NMR - protein i vattenlösning, mäter distanser mellan (vanligen) H-atomer (H-H). |
|
|
Hur fungerar MALDI-TOF |
Masspektrometri, baserat på accelerationen av joner i gasfas i ett elektriskt fält. Skjuter med laser för att jonisera proteiner, olika proteiner har olika massa och färdas därför olika snabbt, på så vis kan en utläsa ett proteins massa. Beror av Newtons lag: F=ma TOF=time of flight |
