Bakteriologi - Metoder

Front 1

Nævn de primære tests

Back 1

KOH

Katalase

Cythocrom oxidase

Gramfarvning

Cellemorfologi(stave/kokker) med nigrosin

Mot-agar og bevægelighed ved mikroskopi

O/F test oxidativ eller/og fermentativ

Endosporer (fase eller gramfarvning)

Aerob vækst

Anaerob vækst

Mac Conkey vækst (MC)

Vækst på NA-agar

Nitratreduktion

(Kolonibeskrivelse)

Hæmolyse

Behov for ekstra CO2

Front 2

Nævn de sekundære tests

Back 2

Indol

Methylrødt (MR)

Voges Proskauer (VP)

TSJ-agar

Gas fra glucose (Durhamrør)

Urease medium

Sulfitreduktion i jernsulfitagar

Simmonsens citrat

BLSF agar

Aesculin hydrolyse (aeskulin blodagar, bouillon)

Koagulase

ONPG

CAMP-test

Loeffler serum (skråserum)

Lecitinase

Simmons citrat

Mannitol saltagar

Xylose bouillon

Rhamnose Bouillon

Front 3

Hvilket mikroskop bruges til farvede præparater?

Back 3

Lysfeltmikroskopi

Front 4

Hvilket mikroskop bruges til ufarvede præparater?

Back 4

Fasekontrastmikroskopi

Front 5

Beskriv gram farvning

Back 5

Viser gram, form og sporer. Gram positive bakterier vil være meget farvede da deres tykke lag af peptidoglycan holder på farven. Gram negative bakterier har et meget tyndt lag peptidoglycan, og derfor udvaskes farven lettere.

Front 6

Hvordan ser man på gram farvning i mikroskop?

Back 6

Der benyttes 100 X olieimmersionsobjektiv, som er forsynet med hvid ringsamt lysfeltskondensor, mærket HF. Sænk objektivet til det netop berører glasset, og juster derfra med finskruen. Der opsøges tynde områder med fritliggende celler, ses bedst i præparatets rand.

Front 7

Beskriv KOH test

Back 7

Hurtig test der viser om det er gram positiv eller negativ bakterie.

I en dråbe 3% KOH røres rigelig kolonimasse ud.

Hvis der dannes tråde/slim er det gram negativ.

Front 8

Beskriv Xylosebouillon og Rhamnosebouillon

Back 8

Test om bakterien kan fermentere via de to sukkerarter; xylose- og rhamnosebouillon. I starten er prøverne grønne, men hvis de bliver gule betyder det at den kan fermentere og der dannes syre.

"Syredannelse ved fermentering."

Front 9

Beskriv katalase test

Back 9

Ved at tilsætte brintoverilte til kolonimassen podet på et objektglas, vil der blive dannet luftbobler hvis bakterien nedbryder brintoverilte, hvilket den gør hvis bakterien indeholder katalase(findes også i blod).

Front 10

Hvad er katalase?

Back 10

Katalase er et enzym, derproduceres af mange aerobe og fakultativt anaerobe bakterier. Som hovedregel erobligat aerobe bakterier og fakultative bakterier positive. Obligat anaerobebakterier er negative(med undtagelser).

Front 11

Beskriv cythocrom oxidase testen

Back 11

Tester om bakterien har enzymet cythocrom C i sin elektrontransportkæde.

Fugtiggør filterpapiret i den ene ende med oxidasereagens, og påfør bakteriemasse. Hvis bakterien kan oxidere cythocrom C bliver filterpapiret blåt efter 10 sekunder, fordi reagensen iltes af cythocrom C.

Front 12

Nævn de vigtigste grupper der er positive for cythocrom C

Back 12

Campylobacter, Pseudomonas,Alcaligenes, Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas, Pasteurellacea (en del stammer ernegative), Neisseriaceae.

Front 13

Hvad bruges Mac Conkey agar til?

Back 13

Bruges til selektivt og indikativt at påvise koliformebakterier samt differentiering af andre Enterobakterier.

Front 14

Det selektive princip på Mac Conkey agar viser?

Back 14

Det viser om bakterien kan tåle galdesalte. Gram negativ kan vokse på galdesalte (indeholder natriumtaurokolat ogkrystalviolet, kaldes for brilliantgrøn).

Grampositiv hæmmes pga. galdesalte, og Enterobacteriaceaeer galderesistente.

Front 15

Det indikative princip på Mac Conkey agar viser?

Back 15

Laktose forgærring.

Natriumtaurokolatomdannes her til taurokolsyre, der danner komplekser med neutral rødt.

Røder en pH indikator, der er rødt i det sure pH <6,8 og gul ved pH> 8,0.

Front 16

Hvilke bakterier forgærer laktose og hvilke gør ikke?

Back 16

Forgærer laktose(enterobakterier): Escherichia, Klebsiella, Enterobacter m.v. (danner store RØDE kolonier, præcipitationszone af samme farve), samt differentiering af andreenterobakterier.

Laktose negative(Enterobacteriaceae): Shigella, Salmonella m.fl. (danner FARVELØSE kolonier)

Front 17

Kan enterokokker vokse på Mac Conkey agar?

Back 17

Ja, de er små, røde eller har rødt centrum.

Front 18

Hvad er BLSF agar?

Back 18

Brilliantgrøn-laktose-sakkarose-fenolrødt-agar. Selektivt medie; inhibitivt på gram positivebakterier, bruges til isolation af salmonellae(laktose negativ).

Indikativt medie; Laktose- og/eller sakkarose fermenterende bakterier medfører syreomslag (gul farve) af pH indikatoren fenolrødt. Bruges til E. colli (laktose positiv)

Front 19

Hvad er et selektivt medie?

Back 19

Selektive medier er tilsat en eller flere inhibitorer/selektive komponenter, så mediet virker inhiberede på visse uønskede bakterier (ledsagerkort)

Front 20

Hvad er et indikativt medie?

Back 20

De er tilsat et indikativt system, dvs der benyttes forskellene i bakteriers evner til at nedbryde forbindelser

Front 21

Hvad er indikative og selektive medier?

Back 21

Disse indeholder begge mediers principper, så man med de selektive principper undertrykker en uønsket ledsageflora og med de indikative får den aktuelle organisme til at tilkendegive nogle karakteristika.

Front 22

Hvad bruges nitratreduktion testen til?

Back 22

Test for om bakterien kan omdanne nitrat til nitrit. Der undersøges om bakterien kan bruge nitrat som alternativ elektronacceptor istedet for ilt.

Front 23

Hvordan påvises nitratreduktionen?

Back 23

Med podenål podes kolonimasse i nitratmedium og inkuberes ved 37 grader til næste øvelsesdag. Da tilføres 1 ml Nit A og 1 ml Nit B reagens, og ved rød farve er der nitrit tilstede. Hvis ikke mediet bliver rødt, tilsættes zink og der aflæses efter 10 min. Hvis mediet bliver rødt

Front 24

Hvad er Nit A og Nit B reagens?

Back 24

Nit A=sulfanilsyre opløst i eddikesyre

Nit B=alfa-naphtol opløst i 96% ethanol

Front 25

Hvorfor skal man nogle gange tilsætte zink til testen nitratreduktion?

Back 25

Zink omdanner nitrat til nitrit kemisk, så det er en hjælp til at se om reaktionen er sket eller i så fald at hjælpe den på vej.

Front 26

Nævn de forskellige stadier af rødfarvning i testen nitratreduktion

Back 26

Stadie 1: tilførsel af Nit A og B reagens --> rød farve=nitrit er tilstede.

Ingen rød farve= tilsæt zink pulver, vent 10 min --> rød farve=nitrat er ikke reduceret

Ingen rød farve= nitrat er reduceret til nitrit

Front 27

Hvordan tjekker man om en bakterie er syrefast?

Back 27

Ved Ziehl-Neelsen farvning

Front 28

Hvilke få bakterier er syrefaste?

Back 28

Mycobacterium(ses oftest), Nocardia og Rhodococcus

Front 29

Er bakterier der vokser på blodagar, syrefaste?

Back 29

Nej, de patogene mycobacterium vokser ikke på sædvanlige medier.

Front 30

Hvordan undersøger man om en bakterie er syrefast?

Back 30

Varmfarvningsmetode: Direkte mikroskopi, farvemetode der viser syrefasthed ved rød farvning. Vævsceller og ikke syrefaste bakterier farves af kontrastfarvestoffet. (farvning foregår i stinkskab pga. udløste fenoldampe)

Front 31

Nutrient agar

Back 31

("natural") tester om bakterien kan vokse uden specifikke vækstfaktorer såsom blod, serum og gærekstrakt.

Front 32

Hvordan udfører man en test på nutrient agar?

Back 32

Med podenål udsås stammerne i hvert sit felt på NA-agar, der er opdelt i 3. Inkuberes ved 37 grader C til næste øvelsesdag.

Front 33

Hvad bruges OF-testen til?

Back 33

Den bruges til at bestemme om en bakterie kan nedbryde/omsætte glukose fermentativt eller oxidativt, eller slet ikke kan optage og omsætte det.

Front 34

Hvordan ser det ud hvis bakterien er nedbrudt fermentativt?

Back 34

Anaerob process, først fosforylering af glukose til pyrodruesyre - Her vil mediet blive helt gult, fordi der er en syre-dannelse (i både anaerobt og aerobt glas).

Front 35

Hvordan ser det ud hvis bakterien er nedbrudt oxidativt?

Back 35

Aerob proces, ingen fosforylering - Oxidative glukose nedbrydende bakterier vil være gule i toppen(syredannelse) og grønne i bunden.

Front 36

Hvad indikere farverne grøn, blå, grøn+gul i OF testen?

Back 36

Grøn: neutral

Blå: basisk, stammerne er glukose-negative

Gul: sur, syredannelse (enten aerobt: oxidativt(i toppen), eller anaerobt: fermentativ omsætning)

Front 37

Forklar OF testen

Back 37

I et agarholdigt glucosemedium med pH indikator podes en kultur ved stik tilbunds og inkuberes i 3 dage ved 37 grader.

Front 38

Hvorfor kan en OF test blive blå?

Back 38

Her vil der være stammer der er glukose negative (ingen omsætning hverken fermentativt eller oxidativt). Blå-farvningvil ske i toplaget af det aerobe glas som følge af ammoniakfrigørelse vedpepton omsætning.

Front 39

Er fermentationen i OF test uafhængig af ilt?

Back 39

Ja, menhvis der var aerobe vilkår ville bakterier der besidder trikarboxylsyre-cyclus(Krebs cyclus) kunne nedbryde de organiske syrer videretil CO2 og H2O.

Front 40

Hvorfor er Hugh og Leifsons glucosemedium at foretrække?

Back 40

Fordi hjælper til at påvise den svage glukonsyre:

Glukose = højt

Pepton= lavt, fordi en omdannelse af pepton kan frigøre ammoniak der kan resultere i en basisk reaktion trods evt. tilstedeværelse af glukonsyre.

Geleret medie= lidt, så syren der dannes i det iltmættede toplag ikke fordeles ved væskestrømninger og neutraliseres af den øvrigesubstratmængde.

Front 41

Hvad er pointen ved MOT-agar?

Back 41

Her ser vi om bakterierne er motile via flageller. Der stikkes med podepind ned i en motilitets-agar, og hvis bakterierne har bevæget sig udenfor stikket er de motile.

Front 42

Hvordan udføres testen MOT-agar?

Back 42

Med en udrettet, flamberet podenål berøres en koloni på blodagar,hvorefter der udføres podning ved stik, kun ca 1 cm ned i motilitetsagar(fast/halv-flydende medie).Inkuberes ved 37 °C.

Front 43

Beskriv MOT-agar og dets funktion.

Back 43

Motilitets-agar er et delvist geleret/halvflydende medium, i hvilket bakterier med flageller() kan udbrede sig ved svømning og gøre mediet uklart.

Front 44

Er der nogle bakterier der ikke viser bevægelighed ved 37 grader C, ved MOT-agar?

Back 44

Ja, Listeria og Yersinia.

Front 45

Hvorfor kan nogle bakterier blive falskt negative ved MOT-agar?

Back 45

Fordi mangeobligat aerobe bakterier ikke svømmer mod en iltgradient, så hvis mediet erhelt friskt vil disse kunne blive falsk negative (se rør 2).

Front 46

Kan man bruget et andet medie end MOT-agar?

Back 46

Ja, man kan bruge et helt flydende medie, BHI, hvor man i stedet ser efter flageller i mikroskop.

Front 47

Hvad er formålet med "Bevægelighedsprøve ved mikroskopi"?

Back 47

At se om der er bevægelse/motilitet i ens bakteriekultur. Her kan man også se cellemorfologi (kok/sporer) og om der er endosporer(kun Clostridium og Bacillus).

Front 48

Beskriv hvordan du ser efter bevægelighed i mikroskop

Back 48

1) med podenål tages 1 dråbe fra bunden af hvert rør hvori der er bakterier i BHI bouillon, og lægges på objektglas. Dækglas placeres ovenpå.

2) en dråbe immersionsolie placeres ovenpå, facekontrastkondensor PH3 og objektiv 100x PH3 bruges. Objektiv sænkes til det rammer glasset, og justeres derfra kun med finskrue.

Front 49

Hvorfor bruge Mannitol saltagar?

Back 49

Fordi den hæmmer alle de bakterier der er saltresistente, dvs som er staphylokokker(selektivt princip). Salt konc. på 7,5%.

Front 50

Hvad er det indikative princip ved Mannitol saltagar?

Back 50

Staphylococcus aureus og epidermidis ermannitolfermenterende. Den dannede syre medfører gult farveomslag i pHindikatoren fenolrødt. Staphylococcuspseudointermedius er mannitolnegativ (rød farve)

Front 51

Hvordan udføres testen Mannitol saltagar?

Back 51

På agar spredes bakterierne med øjepodenål ved stregpodning på den ene halvdel, den anden bruges til farve sammenligning. Inkuberes ved 37 grader C til næste dag.

Front 52

Hvad bruges orto-Nitrophenyl-beta-D-Galactopyranosid(ONPG) testen til?

Back 52

Påvisningaf beta-galaktosidase(enzym; lactase) aktivitet - laktoselignende forbindelse indeholdende ONPG- hvis ONPG spaltes, frigøres O-nitrofenol, som ved alkalisk pH er gul.

Gul=ONPG er spaltet pga enzymet som dannes af staphylococcuspseudintermedius(og ikke af S. aureus).

Front 53

Hvordan udføres ONPG testen?

Back 53

Rigeligkolonimasse overføres til røret ONPG der indeholder sterilt vand. Med ensteril(flamberet) pincet tilsættes en ONPG-tablet og røret inkuberes ved 37grader C til næste øvelsesdag. Glas der er farveløse efter 3 timer er negative.Efter inkubation i 1 døgn kan der opstå en svag gul farve, som ikke kanfortolkes sikkert, da den kan bero på en uspecifik spaltning af substrateteller på en svag betagalactosidase-aktivitet.

Front 54

Hvilke tests nedbryder aminosyrer og andre N-forbindelser?

Back 54

Urease medium, indol medium, sulfitreduktion i jernsulfitagar.

Front 55

Hvad tester man for ved CAMP-testen?

Back 55

Om bakterien kan lysere blod når erythrocytterne i forvejen er påvirket af betahæmolysin fra staphylococcus aureus. Det ses ved enten forstærket/hæmmet hæmolysezoner (læs: opklaring)

CAMP-faktoren er usynlig og kan ikke ses medmindre den kombineres med betahæmolysin.

Front 56

Kunne man finde på at kombinere CAMP-testen med æsculin blod-agar?

Back 56

Ja, det er smart da man ved undersøgelse af streptokokker så både kan se æskulinhydrolyse samt CAMP-reaktion på samme plade.

Front 57

Hvilke streptococcus er CAMP-positive?

Back 57

Streptococcus agalactiae og nogle Streptococcus uberis er CAMP positive.

Front 58

Hvordan udstreger man staphylokok og streptokok i en CAMP-test?

Back 58

En betatoksisk stafylokok udstreges (eller et sterilfiltrat af en stafylokok-bouillonkultur) som diameter. Streptokok-kulturerne udstreges vinkelret derpå (fra kant til midte, men uden at røre stafylokok-stregen). Inkubation. Aflæs for opklaring.

Front 59

Hvad er Aeskulin blodagar?

Back 59

En agar plade med aeskulin, et fluorescerende glykosid under UV, som er sammensat af aeskuletin ogglykose.

Front 60

Hvordan bruger man aeskulin blodagar til at karakterisere bakterier?

Back 60

Hvis en bakterie kan spalte aeskulin (til aeskuletin og glykolyse) vil der ikke være en zone med flourescens omkring dem.

Front 61

Hvordan kan man påvise aeskulin hydrolyse?

Back 61

På blodagar og i bouillon.

Front 62

Hvad sker der under en aeskulin hydrolyse?

Back 62

Aesculin er et glykosidbestående af glukose og aglyconen aeskuletin. Dette spaltes, og der dannes sort bundfald i bouillon pga aeskuletins jernkompleks (ferricitrat) og kan også ses på blodagar.

Front 63

Hvordan udøves testen aeskulin bouillon?

Back 63

Med udrettet podenål/øjepodenål podes kolonimasse i rør med aeskulin bouillon. Inkuberes ved 37 grader C til næste øvelsesdag.

Front 64

Hvad nedbryder man på Loeffler serum (skråserum) ?

Back 64

Protein.

Front 65

Hvad undersøger man ved testen Loeffler serum (skråserum)?

Back 65

Om bakterien kan nedbryde serum (proteolyse), en serum-smeltning.

Front 66

Hvordan kan man se om bakterien nedbryder serum ved Loeffler serum (skråserum) testen?

Back 66

En positiv reaktion vises somudhuling i mediet efter zigzag podning og inkubation.

Front 67

Hvordan udføres Loeffler serum (skråserum)?

Back 67

Med randen af øjepodenål berøres en koloni og øjepodenålen føres til bunds i skråserum-glasset uden at berøre mediet. På bunden berøres mediet og øjepodenålen føres tilbage med zig-zag bevægelser, så mediets overflade podes. Inkubation, 37 grader C til næste gang.

Front 68

Hvorfor bruger man sulfitjernagar?

Back 68

Sulfitjernagar bruges for at se om bakterien er en klostridium eller salmonella, da disse kan reducere sulfit. Indikativt substrat.

Front 69

Hvordan kan man se om der er sket en reduktion af sulfatforbindelser i sulfitjernagar?

Back 69

Kan ses pga det indikative princip der sker ved en reduktion af sulfit til H2S (svovlbrinte) der reagere med de jernioner der er tilstede og danner FeS der er uopløseligt og ses ved sort udfældning (ferrosulfid) omkring/i de sulfitreducerende klostridier/salmonella.

Front 70

Hvilken reaktion sker ved lecitinase testen og hvad udføres den på?

Back 70

Udføres på æggeblommeagar. Reaktion med lecitinase positive bakterie stammer som spalter fedtsyrer fra lecitin, hvilket frembringer en hvid uklarhedszone i mediet, under og omkring kolonien (stregpodning).

Front 71

Hvordan udføres lecitinase testen?

Back 71

På æggeblommeagar podes bakterierne med øjepodenål som en diameter. Inkubation ved 37 grader C til næste øvelsesdag. Her aflæses for hvid uklarhedszone(=positiv)

Front 72

Nævn nogle positive lecitinase bakterier

Back 72

Bl.a. Bacillus cereus,Clostridium og Staphylococcus aureus.

Front 73

Hvad bruges VLHF testen til?

Back 73

Bruges til at aflæse vækst aerobt (i overfladen) eller anaerobt (i bunden).

Front 74

Hvordan udfører man en VLHF test?

Back 74

Med udrettet podenål podes kolonimateriale i rør med VL-halvflydende medium ved stik til bunds. Inkubation 37 grader C til næste øvelsesdag, aflæsning for vækst i bunden(=anaerob) og i toppen(=aerob).

Front 75

Hvorfor ser vi en rød farve ved VLHF tests?

Back 75

Mediet indeholder cysteinhydrochlorid som reduktionsmiddel og resazurin som redoxindikator, som er rød på iltet form, ufarvet på reduceret form. Den oxiderede øverste del af mediet er rød, den reducerede dybere del er ikke rød.

Front 76

Hvad kalder man også CO2-dyrkning?

Back 76

Candle jar

Front 77

Hvad tester man ved CO2/Candle jar?

Back 77

Man tester bakteriens mulighed for at vokse under en lavere iltspænding, højere CO2 spænding - og altså har brug for mere CO2. Hvis bakterier kan vokse påagarmedium i almindelig atmosfære, har de ikke obligat krav om ekstra CO2.

Front 78

Hvilke bakterier har brug for mere CO2?

Back 78

Capnofile bakterier.

Front 79

Hvordan er miljøet i candle jar? (i %)

Back 79

10-15 % ilt

5 % CO2 spænding

80 % N2

Front 80

Hvordan udføres candle jar testen?

Back 80

Et stearinlys sættes ned i et lufttæt glas, med bakterier på blodagar. Lyset vil gå ud ved den rette ilt-tension. Mange bakterier vokser bedre med en højere CO2 koncentration.

Front 81

Hvad sker der ved anaerob dyrkning i candle jar?

Back 81

Anaerob dyrkning foregårved 0% ilt og 10% CO2, hvilket opnås ved at lægge et brev med ascorbinsyre nedtil prøverne i en lufttæt beholder.

Front 82

Hvad måler man ved en OD måling?

Back 82

Den samlede biomasse, døde som levende celler. (SætterOD600=1 fx?)

Front 83

Hvordan foretager man en OD-måling?

Back 83

Udtag 1 ml fra hver kolbe og overfør prøve til kuvetter. Mål OD600på prøven (husk at nulstille overfor rent medie). Gentag målingen.

Front 84

Forklar de 4 faser i den bakterielle vækstkurve.

Back 84

Lag fase: tilvænning til omkringliggendemiljø (pH, temperatur, næring)

Eksponentiel fase: binær fission(bakteriers deling)

Stationær fase: mange bakterier, mange affaldstoffer, lidt næring à populationen opretholdes

Dødsfase: næring opbrugt à celledød.

Front 85

Hvad er gram negativ og hvad er gram positiv - hvorfor?

Back 85

Gram positive bakterier vil beholde farve pga deres tykke lag af peptidoglycan. Gram negative bakterier har et tyndt lag peptidoglycan, og derfor udvaskes farven lettere.

Front 86

Hvad sker der for cellerne under de forskellige kardinaltemperaturer?

Back 86

Minimum = Cellemembranen bliver alt for stiv til at udførede cellulære processer.

Maximum = Proteiner falder fra i hinanden(denaturerer) og vigtige cellekomponenter (ATP, DNA) nedbrydes.

Optimum = optimale temperaturer for vækst.

Front 87

Hvordan udføres en koagulase test?

Back 87

Bakteriestammen podes i en bouillon (fx trypsinfordøjet oksehjertebouillon). Dagen efter sættes 0,5 ml af kulturen til et glas med 0,5 ml kaninplasma. Inkubation ved 37 grader C og aflæsning for koagulation (stivnet) efter 4 og 24 timer.

Front 88

Hvorfor skal man aflæse to gange under inkubation ved koagulase test?

Back 88

Fordi stafylokokker kan producere fibrinolysin som atter kan bringe det koagulerede plasma på flydende form.

Front 89

Hvad undersøger man ved koagulase prøven?

Back 89

Stafylokokkers evne til at koagulere stabiliseret plasma. Fibrinogen --> staphylococcuscoagulase --> fibrin

Front 90

Er koagulase og Clumping Factor det samme?

Back 90

Nej, de er af forskellig kultur, men ofte begge til stede samtidig. Clumping factor undersøger plasmas evne til at fremkalde sammenklumpning i suspensioner af stafylokokker.

Front 91

Hvad bruger man Nigrosinfarvning til?

Back 91

Til at se bakteriens form.Bakterien bliver farveløs på en sort baggrund i mikroskopet.

Front 92

Hvordan udføres nigrosinfarvning test?

Back 92

Med en øjepodenål afsættes en lille dråbe nigrosin på et objektglas. Straks efter med en udrettet steril podenål tages lidt kolonimasse fra enbakterie ad gangen og udrøres i nigrosindråben. Med podenålens sideflade spredes nigrosindråben til enhalvgennemsigtig hinde. Efter luftørring er præparatet klar til mikroskopi (olieimersionsobjektiv, HF)

Front 93

Hvad bruger man fasekontrastmikroskopi til?

Back 93

Til at se bevægelighed og sporer (som ved bacillus cereuseller clostridium sporogenes). Her opløser man blot lidtaf bakterie-kulturen i en dråbe vand, lægger et dækglas over og kigger på det imirkoskopet.

Front 94

Forklar de to hæmolyser

Back 94

Allfahæmolyse: grønfarvning af mediet(nogle bakterier er grønne i sig selv, og laver ikke nødvendigvis alfahæmolyse).

Betahæmolyse: en opklaring ses omkringbakterierne.

Front 95

Hvordan ser hæmolyse ud ved staphylococcus? (hint: 4 slags)

Back 95

Alfahæmolyse: Opklaret, bred, uskarp rand

Betahæmolyse: Uopklaret, bred, skarp rand

Deltahæmolyse: Opklaret, smal, skarp rand

Beta-Deltahæmolyse: Dobbelt hæmolyse, hvor den yderste hæmolyse erinkomplet

Front 96

Back 96

Alfahæmolytisk streptokok, grøntfarvet zone.

Front 97

Back 97

Betahæmolytisk streptococcus equi, opklaring.

Front 98

Back 98

Alfahæmolytisk staphylococcus aureus. Bred opklaret zone med uskarp rand.

Front 99

Back 99

Deltahæmolytisk staphylococcus aureus. Smal. Skarprandet hæmolyse.

Front 100

Back 100

Betahæmolytisk staphylococcus aureus.

Front 101

Back 101

Beta-delta hæmolytisk staphylococcus aureus.

Front 102

Back 102

Non-hæmolytisk staphylococcus species

Front 103

Hvad bruges Simmons citrat til?

Back 103

Et syntetisk medie tiladskillelse mellem Enterobacteriaceae, en test for behovet for vækst-faktor. Salmonella vokser,Escherichia coli gør ikke.

Front 104

Hvad er kulstof- og nitrogen-kilden i Simmons citrat?

Back 104

Nitrogenkilde: ammonium

Kulstofkilde: citrat

Bakterier der kan udnytte begge kilder kan vokse på dette substrat.

Front 105

Hvorfor er mediet grønt i Simmons citrat?

Back 105

Mediet er grønt pga.citronsyre – ved forbrug af denne syre bliver mediet basisk og indikatorenskifter til blå fordi pH indikatoren erbromthymolblåt.

Front 106

Hvordan udføres Simmons citrat?

Back 106

Mediet podes ved zig-zag podning og inkuberesved 37 °C til næste dag for aflæsning. Positiv=Salmonella.

Front 107

Hvilke tre sukre består tre-sukker-jern-agar af og hvad er princippet?

Back 107

Tresukkerjern agar beståraf et bundlag samt en skråflade og indeholder 0,1% glukose og 1% laktose og 1% sukrose. Indikativt substrat til differentiering af gram negative stave. pH-indikator: fenolrødt.

Front 108

Hvordan udføres testen tre-sukker-jern-agar?

Back 108

Med udrettet podenål med kolonimasse tilsås medietved stik, når nålen trækkes tilbage afsluttes med zig-zag overfladepodning afskråfladen.

Inkuberes ved 37 °C til næste dag.

Front 109

Hvad ser vi på billedet? Forklar.

Back 109

Front 110

Hvad vil man påvise ved Voges Proskauer testen? Og hvilken farve ses ved en positiv prøve?

Back 110

Anvendes til påvisning afbutandiolgæring ved påvisning af mellemproduktet (acetoin acetylmetylkarbinol).

Positiv= stærk rød/pink

Front 111

Hvordan udføres Voges Proskauer testen?

Back 111

Øjepodenål med kolonimasse podes iClark&Lubs medium. Inkuberes ved 37 °C til næste dag. Der tilsættes 5% alkoholisk alfa-naftol og 40%kaliumhydroxid.

Acetoin iltes kemisk til diacetyl ved tilsætningaf alfa-naftol samt en stærk base.

Front 112

Hvad er princippet bag methylrødt-prøven?

Back 112

Metylrødt-prøven er en bestemmelse af slut-pH i glukose-fosfat medium. Hvis substratets slut-pH er under 5, fremkommer rød farve(metylrødtpositiv), mens svagere syredannede bakterier viser gul farve.

Front 113

Hvordan udføres Metyhlrødt prøven?

Back 113

Øjepodenål med kolonimasse podes iClark&Lubs medium(peptonvand med 1% glucose). Inkuberes ved 37 °C til næste dag. pH indikator ’metylrødt’ tilsætte. Aflæsning.

Front 114

Hvad er Clark&Lubs medium?

Back 114

Peptonvand med 1% glucose.

Front 115

Aflæs prøven.

Back 115

Rød ved pH < 5 = Methyl Rødt positiv(syredannelse). Gul ved pH > 5 = Methyl Rødt negativ.

Front 116

Hvad sker der ved en Indol test?

Back 116

Aminosyren tryptofan kanfraspalte alanin-sidekæden under dannelse af indol (ses som indol i toppen af glasset).

Front 117

Hvordan udføres testen Indol medium?

Back 117

Med øjepodenål + kolonimasse podes iindolbouillon. Inkubation ved 37 °C til næste dag. I bouillonen tilsættes få dråber Kovacsindolreagens. Efter let omrystning ekstraheres indol iamyl-alkohollaget, der lejrer sig øverst i glasset, og udvikler en rød farvehvis positiv. Negative reaktioner forbliver gule.

Front 118

Hvad bruges Aminosyredecarboxylase base (ADG) til?

Back 118

Til bestemmelse af gram negative stavbakterier, hvor især dekarboxylaserne for Arginin, Lysin og Ornithin er betydningsfulde.

Front 119

Hvad er dekarboxylaser? (ADG test)

Back 119

Dekarboxylaser omdanner aminosyrer til basiske aminer. Aminosyredekarboxylaserne er inducible enzymer der kun dannes når substratet er til stede og kun ved stærkt surt pH. pH optimum for enzymaktivitet er lav. Mediet indeholder glukose og dets initiale pH er 6,0 (brunlig farve)

Front 120

Hvordan vil glukosefermenterende bakterier agere i ADG-testen? Og hvilken effekt vil det have på pH?

Back 120

Glukosefermenterende bakterier (fx enterobacteriaceae) vil fermentere glukosen med pH-fald til følge (fra brun til gul farve). Herefter dannes aminen som følge af dekarboxylering, og der sker en stigning i pH (violet farve).

Ligning:

Glucosefermenteres --> pH falder

Lysindecarboxyleres til en amin --> pH stiger

Indikator:bromkresolpurpur

Front 121

Hvad kan ADG-mediets indhold af pepton medføre?

Back 121

Kan give anledning til uspecifik alkalidannelse, hvis bakteriernes respiratoriske stofskifte går igang. Dette basiske omslag forhindres ved at gøre mediet delvist anaerobt med et lag paraffinolie.

Front 122

Hvornår er en ADG test positiv?

Back 122

Ved et basisk omslag i testmediet sammenholdt med en gul farve i kontrollen.

Front 123

Hvad tester man for ved en Urease test?

Back 123

Om ureaseproducerende bakterier har enzymet urease, hvilket vil ses hvis enzymet spalter urinen til CO2 og NH3.

Front 124

Hvilken reaktion(basisk/sur) sker under en urease test?

Back 124

Det vil fremkalde en basisk reaktion, der vises ved rødfarvning af pH-indikatoren fenolrødt.

Front 125

Hvordan udføres urease test?

Back 125

Med øjepodenål + kolonimasse podes ureasemedium. Inkubation ved 37 °C til næste dag. Aflæsning; rød=positiv - gullig/neutral=negativ (pga. Syredannelse vedfermentering)

Front 126

Hvorfor kan en falsk positiv reaktion opstå ved urease test?

Back 126

Pga. basiske nedbrydningsprodukterfra mediets indhold af pepton. Derfor består mediet af glukose som underfermentering kan danne syre og negative test kan fremstå gullige.

Front 127

Hvordan virker kontrolmediet i urease test?

Back 127

Kontrolmedium anvendes udenurinstof. Kontrolmediet skal vise gullig (hvis der sker fermentering) ellers neutralrødgullig farve.

Front 128

Hvad skal man være opmærksom på ved urease test?

Back 128

Testen kræver bakterielvækst for at få produceret urease (ellers anvend urease enzymtest).

Front 129

Hvad tester urease-enzym test?

Back 129

Tester for urease uden nogen form for bakteriel vækst. Reaktionen drives alene af det med inoculum tilsatte enzym,hvilket er baggrunden for den store podedosis.

Front 130

Hvad er fordelen ved urease-enzym testen?

Back 130

At også bakterier, somvokser dårligt, kan testes. Bakterier som ikke kan vokse med urinstof-mediet er fxcorynebacterium og actinobacillus.

Front 131

Hvordan udføres urease-enzym test?

Back 131

Med 2x øjepodenål podes ureasemedium med den maximale kolonimasse pr. nål. Inkubation ved 37 °C, aflæses for basisk omslag (rød farve) efter 15 min, 2 timer og 20 timer. Ingen farve efter 20 timer=negativ prøve. Kontrolmediet må ikke vise rød farve. Efter 2 timer bør der ske en middelstærk reaktion.

Front 132

Hvordan udføres en test på Slanetz agar?

Back 132

Overfladeudsæd og inkubation ved 37 °C i 2-3 døgn.

Front 133

Hvad anvender man Slanetz agar til?

Back 133

Selektivt og indikativt substrat til påvisning af "fækale streptokokker"

Front 134

Hvad er det selektive princip på Slanetz agar?

Back 134

Natriumazid hæmmer de aerobe og heraf specielt gramnegative bakterier.

Front 135

Indikativt princip:

Back 135

Visse enterokokker reducerer tetrazoliumchlorid til rødt formazan der farver kolonien rød i forskellig grad.

Front 136

Back 136

Front 137

Hvad er coliforme bakterier?

Back 137

Laktose positive enterobacteriaeceae